Einfluss des pH-Werts in der Umkehrphasenchromatographie

Der pH-Wert der mobilen Phase in der Umkehrphasen-HPLC ist ein wichtiger Faktor, er kann sowohl die Peakform als auch die Retentionszeit des Moleküls beeinflussen, da er den Ionisationszustand des Moleküls und damit die Chemie der Wechselwirkungen in der HPLC beeinflusst Säule. Es ist daher wichtig, den korrekten pH-Wert für die Verbindung aufrechtzuerhalten, die durch die pH-Änderung der mobilen Phase und des Puffers beeinflusst werden kann.

Das Triethylamin und die Trifluoressigsäure sind übliche Modifikatoren für die mobile Phase, aber sie halten den pH-Wert nicht aufrecht, dafür benötigen Sie eine Pufferlösung. Sie widerstehen einer Änderung des pH-Werts, wenn geringe Mengen Säure oder Lauge zugesetzt werden. Eine Pufferlösung enthält eine Mischung aus einer schwachen Base und ihrer konjugierten Säure (oder einer schwachen Säure und ihrer konjugierten Base).Der Einfluss des pH-Werts der mobilen Phase in der Hochleistungsflüssigkeitschromatographie kann die Selektivität, die Retentionszeit und die Robustheit der Methode beeinflussen.

Selektivität:Kleinste Änderungen des pH-Werts der mobilen Phase können sich auch dramatisch auf die Selektivität schwach ionisierbarer Analyten auswirken.

Die Retentionszeit des Analyten:Wenn sich der pH-Wert der mobilen Phase ändert, tritt eine dramatische Änderung der Retentionszeit von sauren und basischen Analyten auf. Wenn die Ionisation dieser Moleküle verändert wird, ist dies oft das Ergebnis unterschiedlicher Wechselwirkungen zwischen der Säule und den Molekülen.

Robustheit der Methode:Wählen Sie für die beste Rauheit einen pH-Wert für den Puffer oder die mobile Phase, bei dem sich Selektivität und RT nicht ändern, wenn sich der pH-Wert geringfügig ändert.

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