RP HPLC -Faktoren, die die Umkehrphasenchromatographie beeinflussen

Die Umkehrphasenchromatographie (RP-HPLC) unterscheidet sich von anderen chromatographischen Techniken, bei denen die Anziehungskräfte zwischen der mobilen Phase und der stationären Phase im Vordergrund stehen. In RP-HPLCDie stationäre Phase ist normalerweise ein inerter Kohlenwasserstoff, der nur mit hydrophoben gelösten Stoffen oder Molekülen wechselwirkt, wobei die Selektivität von Lösungsmitteleffekten dominiert wird. Im Allgemeinen besteht die Umkehrphasenchromatographie nur aus Wasser in den mobilen Phasen, oder Wasser plus ist ein organisches Lösungsmittel, z. B. Methanol, Acetonitril usw. Trotz jüngster Zeit wurde Interesse an nichtwässrigen mobilen Phasen geäußert. In jüngster Zeit wurde jedoch Interesse an nichtwässrigen mobilen Phasen geäußert.
Hier werden einige Faktoren erwähnt, die die Umkehrphasenchromatographie beeinflussen.

Die Durchflussmenge des Systems:Es wird davon ausgegangen, dass die Flussrate ein signifikanter Faktor bei der Auflösung kleiner Analyten ist, einschließlich Proteinverdauungen und kleiner Peptide bei Umkehrphasentrennungen.

Die Länge der verwendeten Spalte:Die Spaltenlänge beeinflusst die Retentionszeit. Wenn Sie die Länge der Säule verringern, verringert sich auch die RT des Moleküls proportional.

Die Temperatur des Systems:Die Temperatur kann einen intensiven Einfluss auf die RP-HPLC haben, speziell für die Moleküle mit niedrigem Atomgewicht. Die bei der Umkehrphasenchromatographie verwendete Laufmittelviskosität nimmt mit steigender Temperatur der HPLC-Säule ab. Da der Stofftransport von Molekülen ein diffusionsgesteuerter Prozess zwischen der stationären Phase und der mobilen Phase ist, führt eine niedrige Lösungsmittelviskosität normalerweise zu einem hocheffizienten Stofftransport und folglich zu einer hohen Auflösung.

Die Gradientenelutionsmethode:Bei einigen Biomolekülen und einigen Analyten müssen Gradientenelutionsmethoden verwendet werden, da sie schwer zu trennen sind oder die Anzahl der Komponenten in der Probe größer ist. Die Gradientenelutionsmethoden können einige Trennungen der Umkehrphasenchromatographie beeinflussen.

Die mobile Phase des Systems:Die mobile Phase der rp-HPLC-Chromatographie besteht aus organischen und wässrigen Phasen wie Methanol, Acetonitril, Wasser und Puffer. Mobile Phasenlösungen haben jedoch eine geringe Pufferkapazität, da sie im Allgemeinen eine starke Säure bei niedrigem pH-Wert mit hohen Mengen an organischen Lösungsmitteln aufweisen. Bei Arbeiten in der Nähe physiologischer Bedingungen sollte eine ausreichende Pufferkapazität aufrechterhalten werden.

👩🔬 Wenn Sie andere ähnliche Artikel wissen möchten Faktoren, die die Umkehrphasenchromatographie beeinflussen sie können die besuchen GRUNDLAGEN DER HPLC