Isokratische und Gradientenelution in der HPLC

Hochleistungsflüssigkeitschromatographie hat isokratische und Gradiententrennungstechniken, beide werden zur Trennung der Moleküle verwendet.

Isokratische Trennungen:Bei der isokratischen Elution bedeutet konstante Zusammensetzung, dass der Gleichgewichtszustand in der HPLC-Säule und die reale Geschwindigkeit der sich in der Säule bewegenden Moleküle konstant sind. Die Wechselwirkungen zwischen mobiler Phase und stationärer Phase sind auch während des Laufs stabil. Dies führt zu zunehmend überraschenden Trennungen, unabhängig davon, ob die Trennkontrolle nicht extrem hoch ist.

Gradiententrennung: Die Gradientenelution erhöht die Trennleistung der HPLC-Chromatographie hauptsächlich aufgrund der dramatischen Verbesserung der scheinbaren Effizienz. Die Gradiententrennungsmethode wird für die komplexe Multimolekülprobe verwendet, da es möglicherweise nicht möglich ist, alle Moleküle in isokratischer Elution zu trennen. Dies führt zu dem allgemeinen Elutionsproblem, bei dem keine Reihe von Bedingungen nützlich ist, um alle Analyten in einer vernünftigen Zeitspanne von einer HPLC-Säule zu trennen, während die Auflösung jedes Analyten noch erreicht wird. Dies erfordert die Durchführung der Gradientenelution. Jede Komponente in der Probenmischung wird auf unterschiedliche Steigungen der Retention im Vergleich zur organischen Zusammensetzung zurückgeführt. Da eine Gradientenmethode verwendet wird, sollte die Säule vor der nächsten injizierten Probe und zu Beginn des nächsten Gradientenlaufs auf den Anfangszustand der Zusammensetzung der mobilen Phase äquilibrieren.

Die Entscheidung über die isokratische oder Gradientenelution hängt von der Anzahl der zu trennenden Moleküle ab. Die Trennung kann entweder beschleunigt oder in der Gradientenauswertung zerlegt werden.

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