SEC HPLC

Größenausschlusschromatographie (SEC HPLC)

Was ist Größenausschlusschromatographie?
Größenausschlusschromatographie (SEC HPLC), auch bekannt als Gelfiltrationschromatographie, ist eine chromatographische Methode, die Moleküle basierend auf ihrer Partikelgröße (eigentlich dem Stokes-Radius der Partikel) trennt. Es wird normalerweise auf große Moleküle oder makromolekulare Komplexe wie Proteine und Polymere angewendet.

Was ist das Prinzip der Größenausschlusschromatographie?
Typischerweise haben verschiedene Moleküle unterschiedliche Elutionsraten, wenn Proben in die Säule eintreten. Die im Porensystem der stationären Phase eingeschlossenen kleinen Partikel können ein Gesamtvolumen (die Summe des gesamten Porenvolumens und des Interpartikelvolumens) durchlaufen. Sie werden für längere Zeit eluieren. Im Gegenteil, größere Moleküle passieren einfach einige Poren der stationären Phase, da sie zu groß sind, um in sie einzudringen. Daher eluieren größere Moleküle schneller durch die Säule als kleinere. Das heißt, je kleiner das Molekül ist, desto länger ist die Retentionszeit.

Jeder spalte Größenausschluss hat eine Reihe von Molekulargewichten für die Trennung. Die Ausschlussgrenze für das obere Ende der Säule ist, dass das Molekülgewicht zu groß ist, um in der stationären Phase eingefangen zu werden. Das untere Ende des Bereichs ist definiert als das Molekulargewicht der Moleküle, das klein genug ist, um in alle Poren der stationären Phase einzudringen. Es ist zu beachten, dass sich Partikel gleicher oder ähnlicher Größe möglicherweise nicht voneinander trennen, indem Sie S.

Wofür wird die Größenausschlusschromatographie verwendet?
Diese Technik wird häufig zur Trennung und Reinigung von Proteinen verwendet. Gemäß Standardproteinen ist diese Technik auch zur Bestimmung des Molekulargewichts (M) nützlich_w) und Partikelgröße. SEC ist die offizielle Technik.

Größenausschlusschromatographie (S oder SEC HPLC) zur Messung des absoluten Molekulargewichts, der Struktur, der Größe und der Konformation von Proteinen.

Größenausschlusschromatographie (SEC oder SEC-HPLC) ist eine Analysetechnik, die gelöste Makromoleküle basierend auf ihrer Elution von Säulen, die mit einem porösen Gel gefüllt sind, nach Größe trennt.

Wenn S gekoppelt mit Lichtstreuung, Viskosimeter und Konzentrationsdetektoren (bekannt als Dreifachdetektion), kann es absolutes Molekulargewicht, Molekülgröße und intrinsische Viskosität messen und Informationen über makromolekulare Struktur, Konformation, Aggregation und Verzweigung erzeugen.

Mithilfe S um das Molekulargewicht und diese anderen Eigenschaften zu messen, können Wissenschaftler Moleküle wie Proteine, synthetische Polymere und natürliche Polymere wie Polysaccharide charakterisieren. Siehe Abbildung 1
Für all diese Moleküle stehen diese Parameter in engem Zusammenhang mit ihrer Leistung in unzähligen Anwendungen. Mit dieser Technik:

Biochemiker können Proteinoligomerisierung, Aggregation, Konjugation und Konformation verstehen.
Polymerchemiker können die Festigkeit, Zähigkeit und Leistung von Polymeren kontrollieren.
Pharmahersteller können das Verhalten von Produkten wie Augentropfen individuell anpassen.
Lebensmittelhersteller können die Leistung und Qualität von Produkten besser verstehen.

Für die Polymer- und Proteincharakterisierung in der Polymer-, Lebensmittel-, Pharma- und biopharmazeutischen Forschung bietet Malvern Panalytical eine Reihe von SEC-Systemen oder einzelnen SEC-Detektoren, einschließlich SEC-MALS, an, die Ihren Anwendungsanforderungen entsprechen.