HPLC Methodenentwicklung für saure Verbindungen

Die Azidität oder Basizität einer Probe wird üblicherweise durch den pH-Wert definiert. Die Wahl eines geeigneten pH-Werts für ionisierende Moleküle erzeugt oft scharfe und symmetrische Peaks in der HPLC. Eine symmetrische Peakform ist bei der quantitativen Analyse unerlässlich, um niedrigere Nachweisgrenzen zu erreichen. Für schwache Säuren liegen PKA-Werte üblicherweise im Bereich von 4 - 6. Bei einem pH-Wert von 3 oder weniger muss die Säure also als neutrales Molekül vorliegen. Bei einem pH-Wert von 7 und darüber ist die Säure negativ geladen. Der Ladungszustand des Analyten ist bei der Trennung der Hochleistungsflüssigkeitschromatographie äußerst wichtig; Deshalb ist fast ständig eine Form der pH-Modifikation erforderlich.Ein geladener Analyt hat typischerweise eine höhere Löslichkeit in Wasser im Vergleich zu einer neutralen Verbindung und weist daher eine viel geringere Retention auf einer Umkehrphasensäule auf.

Wenn wir eine Umkehrphasensäule verwenden möchten, muss die Säure in ihrer neutralen Form vorliegen, wobei die Retention hoch sein sollte. Wenn Verbindungen einige oder keine polaren Gruppen haben und es eine beträchtliche Anzahl von Kohlenstoffen enthält, ist unsere Arbeit normalerweise ziemlich einfach. Wir bevorzugen 0,1% Ameisensäure oder 0,1% Phosphorsäure, die alle in ihrer neutralen Form gehalten werden müssen. Anschließend stellen wir die Menge an organischem Lösungsmittel nach Bedarf ein, eine geringere Menge an organischem Lösungsmittel bedeutet mehr Retentionszeit eines Moleküls. Wenn der Analyt polarer ist, kann die Retentionszeit in jeder dieser Phasen abnehmen.

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