Isokratische und Gradienten-HPLC / Unterschied zwischen

Isokratisch gegen Gradient

Es gibt zwei verschiedene Möglichkeiten, wie wir die HPLC-Methode ausführen können, nämlich isokratische Elution (isokratische hplc) und Gradientenelution(hplc-Gradient). Bei der isokratischen Elution wird ein Gemisch aus mobiler Phase oder einem Lösungsmittelsystem zur Trennung der Probenkomponenten verwendet und es ist über die gesamte Testzeit konsistent. Es gibt keine Änderungen in der Zusammensetzung der mobilen Phase, die zwischen dem gesamten Lauf des isokratischen Systems vorgenommen werden können.

Die Zusammensetzung der mobilen Phase im Gradientensystem variiert während des chromatographischen Durchlaufs und beeinflusst daher die Retention der Analyse. Die Trennung im Gradientenmodus kann entweder beschleunigt oder abgebremst werden. Im Gradientensystem sollte die Zusammensetzung der mobilen Phase zeitlich verändert werden, so dass es sich um einen Flussgradienten handelt, wenn das mobile Phasenverhältnis während des gesamten Prozesses der Analytentrennung nicht verändert wird, dann wird es als isokratische Elution betrachtet.

Der Hauptunterschied zwischen isokratischen (I) - und Gradienten (G) -Systemen besteht darin, dass die isokratische Elution eine einzige mobile Phasenzusammensetzung mit der gleichen Polarität verwendet, während die Gradientenelution mehr als eine mobile Phase verwendet und die Polarität von allmählich erhöhen oder verringern kann das Mobiltelefon während des gesamten Trennungsprozesses.

Der Hauptunterschied zwischen I- und G-Elution besteht darin, dass die isokratische Elution die Aufrechterhaltung einer wiederkehrenden Konzentration in der mobilen Stufe zum Ziel hat, während die Gradientenelution die Aufrechterhaltung einer variablen Konzentration in der mobilen Stufe zum Ziel hat.

Begriff isokratisch und Gradientenelution werden in der Chromatographie verwendet. Im Zuge einer chromatographischen Entwicklung verwenden wir einen stationären Tisch, der eine nicht mobile Substanz ist, gekoppelt mit einem mobilen Tisch, der mobilen Substanz. Die isokratische und Gradientenelution beschreibt die Eigenschaften des mobilen Tisches.

Elution definieren - Was ist Elution

Elution ist der Prozess der Extraktion eines Materials aus einem anderen durch Waschen mit einem Lösungsmittel

Elution definieren

Der eluieren ist das Analytmaterial, das aus dem Chromatographen austritt. Es umfasst insbesondere sowohl die Analyten als auch die gelösten Stoffe, die die Säule passieren, während das Elutionsmittel nur der Träger ist.

Eluent definieren

Der elutionsmittel oder elutionsmittel ist der "Träger"-Teil der mobilen Phase. Es bewegt die Analyten durch den Chromatographen. In der Flüssigkeitschromatographie ist das Elutionsmittel das flüssige Lösungsmittel; In der Gaschromatographie ist es das Trägergas.

Was ist isokratische Elution? (isokratische hplc)

Isokratisch bedeutendes Beispiel

Isokratische Elution ist ein Begriff, der in der Chromatographie verwendet wird, wenn die mobile Stufe eine wiederkehrende Konzentration aufweist. Hier ist die Konzentration der mobilen Stufe während des gesamten chromatographischen Durchlaufs wiederkehrend. Bei dieser Entwicklung haben wir die Möglichkeit zu sehen, dass die Peakbreite mit der Retentionszeit linear im Chromatogramm zunimmt. Dies bringt jedoch einen Nachteil mit sich: Die spät eluierenden Peaks werden sehr flach und breit. Dann werden diese breiten Gipfel schwer als Gipfel zuzulassen.

Weiterhin ändert sich bei der isokratischen Elution (IE) die Selektivität in der Funktionalität der Säulendimensionen nicht. Dies bedeutet, dass die Selektivität nicht von Änderungen der Spaltenabmessungen abhängt. Länge und Durchmesser werden hier als Säulenmaße betrachtet. Dann eluieren die Peaks in der gleichen Reihenfolge.

Was ist Gradientenelution? (hplc-Gradient)

Stufenelution ist ein Begriff, der in der Chromatographie verwendet wird, wenn die mobile Stufe eine variable Konzentration aufweist. Mit anderen Worten, die Konzentration der mobilen Stufe muss nicht wiederkehrend gehalten werden. Unter anderem verwendet bei der HPLC ein übliches Spaltverfahren zu Beginn 10% Methanol und endet bei 90%, wobei die Konzentration allmählich ansteigt. Die mobile Stufe besteht aus zwei Komponenten: einem schwachen Lösungsmittel und einem starken Lösungsmittel. Das schwache Lösungsmittel erleichtert es dem gelösten Stoff, langsam zu eluieren, während das starke Lösungsmittel den gelösten Stoff leicht eluieren lässt. Bei der Reverse-Stage-Chromatographie verwenden wir Wasser als schwaches Lösungsmittel und organisches Lösungsmittel als starkes Lösungsmittel.

Darüber hinaus verringert das Gradientenelutionsverfahren die später eluierenden Elemente, um sie schneller eluieren zu lassen, was zu einem engen Peak im Chromatogramm führt. Dieses Verfahren optimiert die Form und Höhe der Spitzen. Darüber hinaus ändert sich bei der Gradientenelutionstechnik die Reihenfolge der Elution mit Änderungen der Säulenabmessungen.

Was ist der Unterschied zwischen isokratischer und Gradientenelution?

Die Begriffe isokratische und Gradientenelution werden in der Chromatographie verwendet. Isokratische Elution und Gradientenelution beschreiben die Eigenschaften der mobilen Stufe. Der Hauptunterschied zwischen isokratischer und Gradientenelution besteht darin, dass IE bezieht sich auf die Aufrechterhaltung einer wiederkehrenden Konzentration in der mobilen Stufe, während sich die Gradientenelution auf die Aufrechterhaltung einer variierenden Konzentration in der mobilen Stufe bezieht.

In der isokratisch elutionstechnik, die Peakbreite nimmt linear mit der Retentionszeit zu. Bei der Gradientenelutionstechnik nimmt jedoch die Retention der später eluierenden Elemente ab, wodurch die Elution effizient wird und schmale Peaks ergibt. Weiterhin ist bei der isokratischen Elution die Selektivität nicht von den Säulenabmessungen abhängig, sondern bei der Gradientenelution ändert sich die Selektivität mit sich ändernden Säulenabmessungen.

Die folgende Tabelle fasst die Unterscheidung zwischen zusammen IE und GE.

Zusammenfassung - Isokratische Elution versus Gradientenelution

Isokratische Elution und Gradientenelution beschreiben die Eigenschaften der mobilen Stufe. Der Hauptunterschied zwischen isokratischer und Gradientenelution besteht darin, dass sich die isokratische Elution auf die Aufrechterhaltung einer wiederkehrenden Konzentration in der mobilen Stufe bezieht, während sich die Gradientenelution auf die Aufrechterhaltung einer variierenden Konzentration in der mobilen Stufe bezieht.

Referenz:

• Braun, Phillis (2001). Fortschritte in der Chromatographie. In: CRC Press. s. 36. ISBN 0-8247-0509-2.

Bild mit freundlicher Genehmigung:

1. "HPLC-Extraktion und -Verwendung" Von USDA - Flickr (gemeinfrei) über Commons Wikimedia

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