¿Wie reduziert man die Peakverbreiterung in der HPLC?

Peakverbreiterung

Peakverbreiterung tritt bei der Hochleistungsflüssigkeitschromatographietrennung auf, die die Trenneffizienz verringert, was zu einer schlechten Auflösung von Analyten führt. Die idealen Peaks in der Chromatographie sind symmetrisch und gaußförmig. Peak Fronting oder Tailing tritt in den asymmetrischen Peaks auf. Peak-Fronting oder -Tailing kann aufgrund schlechter Qualität der HPLC-Säule oder des Totvolumens des Systems auftreten.
Die Peakverbreiterung wird durch eine Reihe von Faktoren verursacht, die hier erwähnt werden, und ihre Vermeidung kann dazu beitragen, die Peakverbreiterung in der HPLC zu reduzieren.

• Die Peakverbreiterung wird durch die Fließgeschwindigkeit der mobilen Phase und die Partikelgröße des Packungsmaterials in den HPLC-Säulen beeinflusst. Je kleiner das Teilchen bei letzterem ist, desto besser ist die Spitzenauflösung.
• Kleine Säulen und hohe Probenmengen führen zu einer Peakverbreiterung.
• Stellen Sie das injizierte Volumen und die Konzentration der Zielkomponente in der Probe sicher.
• Die Zusammensetzung der mobilen Phase im Gradientenmodus besteht aus steilen Türmen, die sich in sehr kurzer Zeit von polar zu unpolar ändern.
• Niederschlag in der Probe bewirkt eine langsame Auflösung und Freisetzung der Komponente; Sie müssen zentrifugieren und filtern, bevor Sie in den Injektor laden.
• Überprüfen Sie die Anzahl der theoretischen Trennstufen für Chromatographiesäulen und regeln Sie die Belastung entsprechend.
• Verwenden Sie die geeignete Wellenlänge des Analyten.
• Wenn die aktuelle Durchflussrate nicht funktioniert, können Sie mit einer höheren Durchflussrate arbeiten, um eine symmetrische Peakform zu erhalten.
• Stellen Sie sicher, dass zwischen der Säule und dem Detektor keine Leckage vorhanden ist.
• Zu langer Schlauch zwischen Säule und HPLC-Detektor.
• Manchmal ist der Schlauch-ID zu groß, was dazu führt, dass sich der Peak verbreitert.
• Machen es möglich, die Probe in dasselbe Lösungsmittel zu injizieren, das in der mobilen Phase verwendet wird.
• Überprüfen Sie regelmäßig die Leistung von Spalten. ältere Spalten spiegeln Spitzenwerte und andere Leistungsprobleme wider.
• Während nur Wasser in der mobilen Phase verwendet wird, kann es wichtig sein, den pH-Wert zu steuern, um die Ladung der interessierenden Moleküle zu kontrollieren.
• Puffer gelten als in der Lage, die Form des Peaks zu verbessern, wenn sie auf dem richtigen pH-Wert ausgewählt werden, um die Ionisation zu steuern.
• Sie können die Peakverbreiterung reduzieren, indem Sie verschiedene Arten von Puffern wie Acetat- oder Phosphatpufferlösungen verwenden, die entsprechend dem PK A-Wert des Moleküls auf den geeigneten pH-Wert eingestellt sind.

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