¿Wie wählt man einen pH-Wert der mobilen Phase in der HPLC?

Wenn eine ionisierbare Verbindung in einer Probe enthalten ist, ist der pH-Wert der mobilen Phase oder des Puffers die wichtigste Variable bei der Verwaltung der Trennung und Retention in einer Umkehrphasenchromatographie (RP-HPLC). Aber wenn es unkontrolliert ist, kann es die Ursache vieler Probleme bei der Trennung sein. Da viele mittels RP-HPLC analysierte Moleküle eine oder mehrere saure oder basische funktionelle Gruppen aufweisen, benötigen hauptsächlich mobile Phasen eine pH-Kontrolle. Dies ist ein Grund dafür, dass Puffer in der HPLC weit verbreitet sind. Da die Retentionszeit ionisierbarer Analyten extrem empfindlich auf den pH-Wert der mobilen Phase reagiert, ist es erforderlich, den pH-Wert durch Zugabe von Puffer zu kontrollieren. Wenn eine kleine Menge Säure oder Base zugesetzt wird, hält ein Puffer die pH.It es ist obligatorisch, den pKa der Komponente vor der Auswahl des Puffer-pH zu kennen.

Es wird für symmetrische Peakform der Puffer 02 pH-Einheiten über oder unter pKa der Komponente vorgeschlagen. Wenn das Molekül PK A nicht bekannt ist, könnte ein Versuch mit einem anderen pH-Wert der mobilen Phase die entsprechenden Ergebnisse liefern. Bei allen chromatographischen Trennungen ist der pH-Wert der wässrigen Phase vor dem Mischen mit der organischen Phase zu bestimmen und einzustellen, um die genauesten und reproduzierbarsten Ergebnisse zu erzielen.

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