Belastbarkeit der HPLC-Säule

Die Säulenbeladung hängt davon ab, um welche Probe es sich handelt, wie sauber sie ist oder wie verschmutzt / verunreinigt sie ist, wie löslich sie ist und von der mobilen Phase. Wenn wir eine Trennung von Analyten in der HPLC durchführen, sollte die Säule nicht überladen werden, da die Reaktion beeinträchtigt wird. In der Regel nicht mehr als 5% des Säulenvolumens laden. Volumenüberlastung und Massenüberlastung sind die Arten der Überlastung in der Chromatographie.

Bei Massenüberladung wird überschüssige Menge an Analyt injiziert und bei Volumenüberladung wird überschüssige Flüssigkeitsmenge auf die Säule injiziert. Die Peaksymmetrie des Analyten in der Hochleistungsflüssigkeitschromatographie hängt von der Zusammensetzung der mobilen Phase, der Säulen- oder stationären Phase und dem verwendeten Probenvolumen ab. Wenn die Säule überlastet ist, wirkt sich dies auf die Peakform und die Peakhöhe aus, indem die Peakverbreiterung, der Überhang und die Breite erhöht werden.

Das maximale Injektionsvolumen in einer Säule hängt von mehreren Parametern ab, wie z. B..

• Der Detektortyp wurde darin verwendet, da er das Empfindlichkeitsproblem beeinflusst.

• Säulenabmessung, dh Partikelgröße, Innendurchmesser und Länge.

• Typ der Spalte, die zum Trennen der Komponenten verwendet wird.

• Sobald die Analysemethode optimiert ist, wird zur Bestimmung der Kapazität des jeweiligen Verpackungsmaterials eine Beladungsstudie an der Analysesäule durchgeführt.

Finden Sie heraus, wie viel Masse wir zum Trennen der Komponenten benötigen. Sobald die erforderliche Masse erkannt ist, können mehrere einfache Gleichungen verwendet werden, um die Größe der für die Reinigung erforderlichen Säule zu berechnen. Außerdem muss das präparative HPLC-System die maximale Flussrate und den maximalen Gegendruck berücksichtigen und kann die Säulengröße begrenzen.

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