Leitfaden zur Auswahl des HPLC-Puffers

Die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie trennt die Moleküle, bei denen die stationäre Phase und die mobile Phase wesentliche Faktoren sind, wobei auch die Puffer mit der organischen Phase in der Analyse verwendet werden. Hier sind einige Tipps zur Pufferauswahl für die HPLC aufgeführt.

• Die Auswahl geeigneter Puffer für die Analyse hängt von den Eigenschaften des Puffers ab, z. B. pH-Bereich, PK A und UV-Grenzwert.

• In der Regel muss der pH-Puffer innerhalb des PK A-Wertes von +/- 1 Verbindungen verwendet werden. Puffer in diesem Bereich widerstehen der Änderung des pH-Werts.

• Wenn der pH-Wert der mobilen Phase des Phosphatpuffers über 7 liegt, beschleunigt dies die Auflösung von Kieselsäure, was zu einer Beschädigung der Säule führt oder die Lebensdauer der Säule verkürzt. Typischerweise beträgt der pH-Bereich der RP-HPLC auf Siliziumdioxid-basierten Packungen 2,00 bis 8,00.

• Vorzugsweise sollte die niedrigste Konzentration gewählt werden, die reproduzierbare Ergebnisse liefert. Normalerweise reicht eine Pufferkonzentration von 10 bis 50 mM für die Trennung von Komponenten aus.

• Wenn die Menge an organischen Modifikatoren in den Puffern niedrig ist oder nicht, kann das mikrobielle Wachstum schnell auftreten, dieses Wachstum wird in den Einlässen der HPLC-Säule anwachsen und Schäden verursachen sowie die Leistung der Säule verringern. Daher werden frisch zubereitete Pufferlösungen verwendet.

• Die Pufferlösung sollte durch einen 0,5-Mikron-Nylonfilter filtriert werden.

• Die mobile Phase der HPLC sollte entgast werden.

• Die Löslichkeit von Phosphat liegt in Wasser, Methanol, Acetonitril und Tetrahydrofuran (THF).

• Einige Salzpuffer sind hygroskopisch, was die Chromatographieergebnisse verändern kann.

• Die Löslichkeit von Ammoniumsalzen liegt üblicherweise in Wasser oder organischen mobilen Phasen vor.

• Trifluoressigsäure (TFA) kann sich mit der Zeit abbauen, absorbiert bei niedrigeren Wellenlängen UV-Detektor.

• Ammoniumbicarbonatpuffer neigen im Allgemeinen zu pH-Änderungen und sind normalerweise bis zu 48 Stunden stabil.

• Häufig verwendete HPLC-Puffer sind Ammoniumacetat, Ammoniumformat, Kaliumdihydrogenphosphat oder Phosphorsäure, Ammoniumhydroxid, Trifluoressigsäure, Ameisensäure usw.

• Heutzutage sind häufigere Probleme im Zusammenhang mit der Kompatibilität mit massenspektroskopischer Detektion, Format und Acetatpuffern ideale Optionen.

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